Тесты на коронавирус: конец мечты об «иммунных паспортах»

Как сдать биоматериал

В большинстве случаев материалом для исследования на коронавирус является соскоб или мазок из ротовой полости, носоглотки, зева. Они берутся средним медицинским персоналом вращательными движениями, а затем помещаются в пробирку с транспортной средой, хранятся в холодильнике. Забор осуществляется специальной щеткой. Во время процедуры не возникает никаких дискомфортных ощущений. Кровь на анализ берется обычно из локтевой вены.

Биоматериал для теста на коронавирус обычно берут из полости рта специальными инструментами

Чтобы тестирование на коронавирус прошло максимально информативно, нужно тщательно подготовиться к процедуре. Не требуется внесения коррективов в рацион питания, а вот от употребления алкоголя придется отказаться. Исказить результаты обследования может прием препаратов с противовирусным действием, глюкокортикостероидов, цитостатиков. Если нет возможности прекратить на время лечение, следует сообщить об этом врачу. При интерпретации результаты он обязательно учтет влияние на них медикаментозной терапии.

Важно! Когда планируется забор биоматериала из дыхательных путей, следует также придерживаться определенных правил. Чтобы не снизить концентрацию коронавирусов в слизистых, нужно в день сдачи образцов не чистить зубы, не промывать носовые ходы лекарственными растворами, не полоскать горло.. В нашей стране широкий охват тестированием с учетом скорости распространения инфекционной патологии

Выполняется преимущественно высокочувствительная ПРЦ-диагностика для выявления РНК коронавирусов или иммуноферментный анализ для обнаружения антител. При желании провериться может каждый желающий, но только платно

В нашей стране широкий охват тестированием с учетом скорости распространения инфекционной патологии. Выполняется преимущественно высокочувствительная ПРЦ-диагностика для выявления РНК коронавирусов или иммуноферментный анализ для обнаружения антител. При желании провериться может каждый желающий, но только платно.

Точность теста на коронавирус

Тесты с помощью специальной аппаратуры все еще точнее

В зависимости от того, заразился ли кто-то совсем недавно, есть ли у него симптомы, или он уже выздоровел, у человека будет разное количество вируса в его организме. Чем ниже концентрация вируса, тем труднее его обнаружить. Другие тесты SARS-CoV-2 позволяют обойти эту проблему, создавая копии генетического материала в образце в надежде, что, если патоген присутствует, в конечном итоге он будет обнаружен.

Данные, представленные Abbott в администрацию по контролю за продуктами и лекарствами США, говорят о том, что в 97,1% случаев быстрый тест на коронавирус правильно идентифицирует человека с COVID-19. Пока неясно, работает ли это соотношение производительности в реальных условиях.

Описание тест-систем

Тест-система для выявления коронавируса — картонная коробка, внутри которой находятся три компонента. Ее содержимое представлено реагентами для экстракции вирусной РНК, обратной транскрипции и проведения полимеразной цепной реакции. В составе последнего есть ферменты, буфер и праймеры — олигонуклеотиды, комплементарные определенным последовательностям генома коронавирусов. Тест-система «Вектор» содержит только реагент для ПРЦ. А вот выделение вирусной РНК и обратная транскрипция выполняются реагентами других зарубежных или отечественных производителей. Подобная недокомплектация объясняется необходимостью быстрого создания информативных тестов в условиях пандемии.

Большой популярностью у медработников и населения пользуются системы для определения в крови антител — иммуноглобулинов, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на вторжение в организм коронавирусов. Причем на данный момент они востребованы не для установления инфицированных, а для обнаружения людей, которые переболели, имеют иммунитет к патогенам этого вида. Они могут быть донорами крови тяжело болеющим, тем самым помогая ускорить выздоровление и даже спасти жизнь.

Это интересно! Тест-системы на антитела выглядят как узкая небольшая пластиковая панель с ячейками, в которые уже внесены реагенты. При добавлении в них капли крови происходит химическая реакция с образованием комплексов антиген-антитело. По окрашиванию конечного продукта судят о присутствии иммуноглобулинов к коронавирусам.

Контрольный образец

Система для тестирования человека на наличие возбудителей коронавирусной инфекции состоит из положительного и отрицательного контрольных образцов. Внешне они не отличаются, выглядят как герметичные пробирки. Тест «Вектор» представлен раствором рекомбинантных плазмид, которые комплементарны какому-либо участку генома коронавирусов и очищенной водой.

В других тест-системах предусмотрено наличие и внутреннего контрольного образца — молекулы РНК, защищенной от воздействия ферментов. При проведении биохимического исследования она добавляется на начальном этапе. Ее введение на стадии выделения необходимо для одновременного прохождения с мишенью. На конечном этапе инертная молекула РНК сигнализирует о правильном проведении лабораторной диагностики.

Наличие контрольного образца в тест-системах на коронавирус позволяет снизить вероятность ошибки

В тест-системе «Вектор» такого внутреннего контрольного образца нет. Поэтому он не рассчитан на применение с первого этапа исследования. Если по какой-то причине при тестировании произойдет сбой, то обнаружить ошибку не получится.

Чувствительность

Аналитическая чувствительность лабораторного анализа — минимальное количество вещества, которое можно обнаружить этим методом. Достаточно капли венозной крови пациента, небольшого количества слизистого секрета из дыхательных путей, чтобы определить в ней инфекционных возбудителей. Не имеет значения, в какой концентрации в биоматериале они находятся. РНК коронавирусов при проведении ПЦР будет установлена при условии, что человек заражен.

Аналитическая чувствительность методик разнится:

• Качественная. Более низкая степень чувствительности, так как анализ проводится только для обнаружения РНК вирусов.
• Количественная. Высокая точность исследования, позволяющая рассчитать концентрацию возбудителей в 1 мл крови, определить их генотип.

Качественный ПЦР анализ проводится для выявления вирусоносительства. А количественный необходим для определения активности инфекционных возбудителей. Чувствительность тест-систем «Вектор» — 105 копий плазмид на миллилитр. Ее достаточно для выявления патогенов, циркулирующих в кровотоке. Но уже созданы и успешно апробированы более чувствительные диагностические системы.

Генетический анализ

Для чего нужен: инструмент эпидемиологов и исследователей SARS-CoV-2

Кому сдавать: недоступен для массового использования

Комментарий: Метод аналогичен ПЦР-исследованию, но в сравнении с ним имеет высокую стоимость и малую пропускную способность, поэтому в меньшей степени подходит для массового использования. Генетический анализ проводится с помощью технологии секвенирования, которая анализирует фрагменты вирусной ДНК или РНК. Его точность приближена к 100%, к тому же, он позволяет обнаружить мутации в вирусе, что помогает ученым отследить перемещения SARS-CoV-2 и оценить его опасность.

Сколько ждать результатов

С помощью современных тест-систем можно определить инфицирован человек коронавирусами за 45-60 минут. А наличие в кровеносном русле антител устанавливают даже за четверть часа. Но стоит учитывать загруженность сертифицированных лабораторий в условиях пандемии. Поэтому ожидать результатов тестирования приходится несколько дней. Исключение — подозрение на развившуюся на фоне коронавирусной инфекции бактериальную пневмонию. В частных медицинских центрах, проводящих платное тестирование, загруженность не столь высока, как в государственных лабораториях. Так что данные исследования могут быть озвучены в течение дня.

Тест на нейтрализующие антитела к рецептор-связывающему домену (RBD) белка S

Для чего нужен: Определение силы иммунитета к коронавирусной инфекции, в будущем – оценка эффективности вакцины.

Кто должен сдавать:

• Те, кто переболел коронавирусной инфекцией ив крови обнаружены антитела IgG
• Те, кто хотят узнать статус своего иммунитета к коронавирусной инфекции

Когда делать: качественный (RBD) анализ антител может проводиться с момента появления IgG в крови – с 3-4 недели с момента контакта с вирусом SARS-CoV-2.

Комментарий: Инфицирование вирусом происходит благодаря способности его мембраны соединяться с клетками организма человека. За это отвечает так называемый рецептор-связывающий домен (RBD) одного из его белков (S). Маркером перенесенной инфекции и наличия иммунитета к ней является наличие IgG к вирусу в крови. Однако количественный анализ на антитела IgG не отвечает в полной мере на вопрос, насколько сильно защищен организм.

О силе иммунитета позволяет судить качественный анализ – тест на нейтрализующие антитела к рецептор-связывающему домену (RBD) белка S коронавируса. Именно такие антитела обладают нейтрализующими свойствами и препятствуют связыванию вируса с клетками человека, тем самым обеспечивая важную роль в определении индивидуального иммунного ответак вирусу SARS-CoV-2. В случае обнаружения RBD-антител в крови, можно сделать вывод о том, что в настоящее время иммунная система организма обеспечивает защиту от коронавирусной инфекции.

Особенности платного тестирования

Сдать платно биоматериал на обследование могут только те, кто не контактировал с людьми, инфицированными коронавирусом. Диагностика не проводится, если у человека есть признаки гриппа или любого острого респираторного заболевания. При оформлении заявки обязательно наличие паспорта. Исследование не может быть проведено на условиях анонимности. Предварительно персонал клиники обязательно соберет анамнез. Необходимо предоставить достоверную информацию о посещении зарубежных стран, возможных контактах с инфицированными.

Любой вид тестирования не гарантирует 100% точности и может давать как ложноотрицательные, так и ложноположительные результаты. О такой вероятности развития событий предупреждают разработчики систем в приложенной аннотации. Поэтому следует выбирать клиники, где исследования проводятся с помощью хорошо зарекомендовавших себя тестов.

Способ применения

Позвольте тесту, образцу, буферу и / или контролю достичь комнатной температуры (15-30 ° C) перед тестированием.

1. Извлеките тестовую кассету из пакета и используйте ее в течение одного часа. Наилучшие результаты будут получены, если испытание будет выполнено сразу после открытия пакета из фольги.
2. Поместите кассету на чистую и ровную поверхность.

Для образца сыворотки или плазмы:

Держите пипетку вертикально, вытяните образец до линии заполнения (приблизительно 10 мкл) и перенесите образец в лунку для образцов (S), затем добавьте 2 капли буфера (приблизительно 80 мкл) и запустите таймер (смотрите иллюстрацию ниже).

Для образца цельной крови Venipuncture:

Держите капельницу вертикально и перенесите 1 полную каплю цельной крови (приблизительно 20 мкл) в лунку для образцов (S), затем добавьте 2 капли буфера (приблизительно 80 мкл) и запустите таймер (смотрите иллюстрацию ниже).

Для образца цельной крови:

Для использования капиллярной трубки: заполните капиллярную трубку и перенесите приблизительно 20 мкл образца цельной крови из пальца в область образца тестовой кассеты, затем добавьте 2 капли буфера (приблизительно 80 мкл) и запустите таймер. (смотрите иллюстрацию ниже).3. Дождитесь появления цветной линии. Ознакомьтесь с результатами через 10 минут (не интерпретируйте результат через 20 минут).Примечание: рекомендуется не использовать буфер после 6 месяцев после открытия флакона.

Расшифровка результатов

IgG ПОЗИТИВНО: * Появляются две цветные линии. Одна цветная линия всегда должна появляться в области контрольной линии (C), а другая линия должна находиться в области линии IgG.IgM ПОЗИТИВНО: * Появляются две цветные линии. Одна цветная линия всегда должна появляться в области контрольной линии (C), а другая линия должна находиться в области линии IgM.IgG и IgM ПОЗИТИВНО: * Появляются три цветные линии. Одна цветная линия всегда должна появляться в области контрольной линии (C), а две тестовые линии должны быть в области линии IgG и области линии IgM.ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ: одна цветная линия появляется в области контрольной линии (C). Никакой линии не появляется в области IgG и области IgM.НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ: контрольная линия не отображается. Недостаточный объем образца или неправильные процедурные методы являются наиболее вероятными причинами отказа контрольной линии. Просмотрите процедуру и повторите тест с новым тестом. Если проблема сохраняется, немедленно прекратите использование тестового набора и обратитесь к местному дистрибьютору.* примечание. Интенсивность цвета в областях тестовой линии может варьироваться в зависимости от концентрации антител 2019-nCov, присутствующих в образце. Поэтому любой оттенок цвета в области тестовой линии следует считать положительным.Внутренний процедурный контроль включен в тест. Цветная линия, появляющаяся в контрольной области (C), является внутренним процедурным контролем. Это подтверждает достаточный объем образца и правильную методическую методику.

Фармакологические свойства

Тест на антитела к коронавирусу

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) и близкая к нему технология «иммунохроматографический анализ» (ИХА) используются для определения антител к белкам коронавируса. ИХА быстрее и проще в проведении, но точность теста, как правило, чуть ниже, чем при использовании метода ИФА.

При попадании коронавируса в тело иммунная система определяет его как возбудителя инфекции и начинает с ним бороться. Чтобы отлавливать вирусные частицы по всему организму и натравливать на них иммунные клетки, уничтожающие захватчиков, иммунная система использует для маркировки антитела – белки, комплементарные к белкам на поверхности вируса. Именно по этим белкам-маркерам, облепившим вирусную частицу, иммунные клетки распознают ее и уничтожают.

Проблема создания таких тестов заключается в том, что белков на поверхности вируса много. Надо выбрать такие, чтобы, во-первых, это были антитела именно к данному вирусу, а не к возбудителю с похожими белками. Во-вторых, не все антитела к белкам вируса активируют процесс ликвидации вирусных частиц. Так что для теста следует отобрать те самые антитела, которые это умеют делать — так называемые «нейтрализующие антитела». Тогда становится понятен смысл проведения теста: есть ли у данного человека защита от новой инфекции? Можно ли использовать его плазму крови в качестве донорской для спасения жизней людей с тяжелой формой COVID-19?

Чем хороши такие тесты? Они позволяют оценить — общался ли человек с коронавирусом и чем это общение закончилось. Наличие IgM антител говорит о том, что организм как раз находится на активной стадии этого общения. Наличие антител IgG указывает на то, что организм научился бороться с вирусом. Если же обнаружены только IgG, значит человек уже выздоровел.

Чем они плохи? Тем, что антитела образуются только через 1-2 недели после инфицирования. По ним нельзя определить болезнь на ранних стадиях. Как было сказано выше, не все антитела подходят для долговременной защиты на будущее. И, наконец, прогноз по результатам теста на антитела на сегодняшний день — вещь эфемерная. Мы понятия пока не имеем, как долго в организме человека могут сохраняться антитела к коронавирусу SARS-CoV-2. Возможно, полгода, возможно, пара лет — как антитела к SARS-CoV-1 и MERS.

Тест на антигены коронавируса

Тесты из этой категории позволяют обнаружить белки вируса (то есть, антигены) в образце мокроты в течение 10 минут. Не надо долго и дорого делать ПЦР-тест, не надо ждать 2 недели до появления антител к этим же антигенам — достаточно использовать тест-полоски, чтобы предположить наличие или отсутствие вируса в носовой полости пациента. Япония 13 мая объявила об утверждении местным Минздравом теста на антигены к коронавирусу SARS-CoV-2, который будет использоваться для тестирования людей, контактировавших с инфицированными людьми.

Почему мы говорим только «предположении» наличия вирусных частиц?Потом что такие экспресс-тесты имеют довольно низкую чувствительность по сравнению с другими методами, поэтому при их применении высок риск получить ложноотрицательный результат.

Спасут ли мир тесты на антиген

Тесты, которые обнаруживают антигены коронавируса (белки на его поверхности), существенно оперативнее: результат можно получить в течение 5-15 минут. Для их проведения берут мазок из носа или с задней стенки глотки.

Чувствительность и специфичность

Тесты на антиген высокой специфичностью: согласно американским Центрам по контролю и профилактике заболеваний (CDC), она стремится к 100%. Это значит, что к положительным результатам этого теста можно относиться с доверием, ложноположительные результаты редки. Но его чувствительность колеблется от 84% до 97,6%, то есть, ниже, чем у ПЦР-теста. Чем ниже чувствительность, тем выше риск ложноотрицательного результата. Американское Управление по контролю за пищевыми продуктами и лекарственными средствами (FDA) рекомендует проверять отрицательные результаты антиген-тестов у людей с симптомами COVID-19 при помощи ПЦР-теста.

Экспресс-тесты на антиген недавно получили плохую прессу. Wall Street Journal в заголовке статьи связал их со вспышкой COVID-19 после приема в Розовом Саду Белого дома. Одним из заболевших оказался президент США Дональд Трамп. Сообщалось, что участники проходили экспресс-анализ при помощи тест-системы BinaxNOW компании Abbot непосредственно перед мероприятием.

У антиген-тестов есть несомненные достоинства. Для них не требуется специальной лаборатории, они дешевле, чем ПЦР. Их можно использовать непосредственно у постели большого (например, в приемном отделении или дома). Потенциально их можно применять в учебных учреждениях и на различных мероприятиях.

Антиген-тест – еще не «тест мечты»

Высокий риск ложноотрицательного результата и необходимость проверки – не все недостатки антиген-теста. Есть и другие причины, по которым существующие тестовые платформы не подходят на роль «народного» теста, который можно быстро провести дома перед выходом на работу.

• Имеющиеся антиген-тесты – не для самостоятельного использования. Для их проведения все равно нужен медработник.
• Они недостаточно дешевые для частого применения. Тестовый набор Abbott стоит 5 долларов, Quidel – 23 доллара. Тестовая платформа компании Beckton Dickinson требует специальный анализатор, который стоит 250-300 долларов. В Москве проведение теста в лаборатории может обойтись примерно в 3 тысячи рублей.
• Неизвестна надежность существующих антиген-тестов при бессимптомном течении COVID-19. В последнем обзоре Кокрейновского содружества такие данные полностью отсутствуют. В настоящее время FDA рекомендует проводить антиген-тесты только людям с симптомами. Например, «прославленный» тест производства Abbott предназначен для использования в течение первой недели болезни.

JAMA приводит пример неудачи использования антиген-теста в домах престарелых в Неваде. Половина положительных тестов, перепроверенных при помощи ПЦР, оказались ложно положительными.

Принцип действия иммунохроматографического теста-анализа

ИХА тест-анализ схема

При погружении теста в физиологическую жидкость она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с жидкостью движется жидкая фаза тест полоски содержащая антитела с красителем. Если в этой жидкости присутствует исследуемый антиген (гормон, онкологический или инфекционный маркер), то происходит его связывание, как с первым типом антител, так и со вторым. При этом происходит накопление антител с красителем вокруг антител. Визуально накопление антител с красителем проявляется в виде окрашивания тест полоски. Свободные антитела с красителем мигрируют далее вдоль полоски и неизбежно взаимодействуют с вторичными антителами в контрольной зоне, где и наблюдается вторая окрашенная (контрольная) полоса.

К – контрольная полоса

Т – тест зона

ИХА тест на антитела показывает заражен ли человек в настоящее время (IgM) и перенес ли человек инфекцию ранее и получил ли иммунитет к повторному заражению (IgG).

ИХА тест в отличие ИФА (ИХЛА) тестов обычно качественный, а не количественный.

ИХА иммунохроматографический тест, примеры

В июне был зарегистрирован первый российский ИХА тест ООО “ХЕМА РЗН 2020/10218

“Набор реагентов для иммунохроматографического выявления антител к вирусу SARS-CoV-2 в сыворотке (плазме) крови “ХЕМАТест анти-SARS-CoV-2″, серии (партии): А2004, С2004
Состав: 1. Кассета – 20 шт. 2. Буфер для образца -1 флакон (4 мл). 3. Инструкция по применению.”

Позже были зарегистрированы еще несколько ИХА тест-систем.

Например:

Набор реагентов “Тест-система иммунохроматографическая для качественного выявления антител IgG / IgM к коронавирусу SARS-CoV-2 в образцах сыворотки, плазмы или цельной крови человека” “ИМБИАН-SARS-CoV-2 IgG/IgM ИХА”, серии: № 20061, №20062, ООО “ИМБИАН ЛАБ”.

Набор реагентов “Тест-система иммунохроматографическая для качественного дифференцированного выявления антител IgM/IgG к коронавирусу SARS-CoV-2 в образцах сыворотки, плазмы или цельной крови человека” “ИХА-СOVID-19-IgM/IgG” по ТУ 21.20.23-300-70423725-2020, ЗАО “ЭКОлаб”.

Тесты системы доступны в разных комплектациях.

Также в России широко используются незарегистрованных ИХА тесты различного происхождения, в условиях пандемии это разрешено.

Про все доступные в России тесты можно почитать в материале:

В #Хрониках Здравоохранения тема анализов на коронавирус рассмотрены более чем в десяти текстах. Разобраны все основные моменты – типы тестов, анализ результатов тестов, правильные схемы тестирования, модели тестирования в Москве, России и мире:

Последнии новости:

Главная тема как защитить себя и своих близких. Всем здравия!

Опубликовано 11.06.2020, версия 0.92 от 16.10.2020

Медицинский раздел на Рулимс

Посвящается Григорию,

помолитесь об его упокоении

Медицине и здравоохранению на Рулимс посвящено несколько десятков текстов:

Охватывается максимально широкий круг тем, несколько примеров.