Экспресс-тест на коронавирус

Перекрестные реакции и инфекционные болезни

Может ли тест на коронавирус быть ложнопозитивным? Вполне. Врачи инфекционисты уверены, что ни один анализ не может дать в принципе стопроцентного результата. Вероятность ошибки, хоть и незначительная, есть всегда, даже если это годами отработанная система, – и тесты на Covid-19 не исключение.

Расшифровку анализов лучше доверить врачу, чтобы избежать ошибки

Диагностика любых инфекционных патологий ведется в двух направлениях. Первое – это поиск возбудителя самой болезни, для чего часто применяются именно ПЦР-системы. На результат могут влиять следующие факторы:

• техника забора биоматериала;
• транспортировка образцов в лабораторию;
• условия хранения;
• тип используемой тест-системы – ее чувствительность и специфичность.

Опытный врач все это учтет и даст оценку по нескольким пунктам, включая:

• общее состояние здоровья, наличие/отсутствие системных заболеваний;
• внешние симптомы и жалобы больного;
• данные лабораторных анализов и инструментальных исследований – ПЦР, КТ и др.

Вторым направлением диагностики является серология (от лат. serum – сыворотка) – получение данных о реакции организма на возбудитель инфекции. Серология – это область иммунологии, изучающей взаимодействие антител с антигенами.

В случае коронавируса к серологическому анализу относятся экспресс-тесты для выявления иммуноглобулинов – антител IqM и IqG. Для собственного самосохранения организм вынужден бороться с патогенами – вирусами, бактериями, грибками и пр. Так почему же возможны сбои в достоверности результатов?

Допустим, человек страдает ВИЧ-инфекцией и проходит антиретровирусную терапию. В этом случае мазок ПЦР будет отрицательным из-за отсутствия вируса в кровяном русле, а серологический анализ даст положительный результат вследствие реакции организма на вирус.

Еще один пример. Человек переболел сифилисом или туберкулезом и вылечился. Даже спустя много лет серологический анализ, вероятнее всего, даст положительный результат на IqG к соответствующему возбудителю.

Еще одна причина – перекрестные реакции, когда тест показывает положительный результат к Covid-19, но он может свидетельствовать о другом заболевании. Например, при сдаче серологического анализа на реакцию Вассермана получен слабопозитивный итог. Затем выясняется, что сдававшая этот тест женщина беременна, или она страдает артритом.

Почему ПЦР-тест пока не спас мир

В настоящее время ПЦР-тесты остаются самыми чувствительными к коронавирусу. В Южной Корее и Новой Зеландии их широкое применение помогло подавить инфекцию, указывает автор публикации в Nature. Однако этот успех не удалось повторить в других странах. Согласно той же статье, в США не удалось добиться их эффективного использования из-за плохой координации, партий некачественных тестов и сложностей с поставками.

Оперативность ПЦР-теста невелика, в лучшем случае он займет несколько часов, в реальной жизни в случае плохого сценария результаты можно ожидать несколько дней. Гипотетически, человек, у которого реакция ПЦР не обнаружила коронавирус, может быть уже инфицированным на момент получения результата анализа. Проведение анализа требует специальной лаборатории и обученных специалистов, то есть, он ресурсоёмкий.

Затрудняет массовое тестирование и сравнительно высокая цена теста. В Москве его проведение на дому может стоить более 5000 рублей.

Кому необходим ПЦР-тест на коронавирус

Есть несколько основных категорий лиц, которые считаются приоритетными:

• бывшие в контакте с людьми, у которых впоследствии был подтвержден COVID-19;
• больные пневмонией;
• обнаружившие у себя симптомы гриппа или ОРЗ после визита в неблагополучные регионы или очаги повышенного заражения;
• граждане старше 65 лет с признаками простуды;
• состоящие в группе риска по состоянию здоровья: онкологические больные, с хроническими патологиями сердца, сосудов, легких, эндокринной системы;
• прошедшие курс лечения от COVID, которым требуется подтверждение выздоровления.

Перечисленным группам исследование должно проводиться в рамках ОМС. Другие желающие провериться на наличие SARS-CoV-2, могут сделать это в лабораториях платно. Необходимые для исследования тестовые системы производятся только в научно-исследовательских институтах, имеющих государственную лицензию.

Как проводится исследование по методу ПЦР

В связи с тем, что коронавирус относится к РНК-содержащим, смысл ПЦР-теста в быстром прямом поиске любых остатков РНК микроба с их предварительным удвоением до цепочки ДНК.

Для анализа берут мазок из зева или кровь из вены.

После этого взятый материал помещают в особые контейнеры, ставят маркировку, опечатывают, перевозят в лабораторию. Сопровождает такой «груз» медработник, одетый в специальный защитный костюм и с соблюдением техники безопасности.

В лаборатории из полученного материала сотрудники выделяют фрагменты РНК-вируса, обратной транскрипцией удваивают моноцепочку РНК до ДНК — матрицы вируса, которую затем размножают не один раз посредством особого фермента полимеразы. Наименование теста и пошло отсюда. Суть в том, что эта РНК особенная и к коронавирусной РНК можно присоединить только такую же цепочку вируса с целью ее удвоения.

Дублей может быть до 45. После этого снова расщепляют полимеразные цепочки. В этот момент на стадии обратного преобразования ДНК в РНК выявляют SARS-CoV-2 или другой вирус, который необходимо было обнаружить. Для этого применяют электрофорез, т. к. благодаря ему можно увидеть все размноженные копии ДНК.

У ДНК отрицательный электрозаряд, а потому она притягивается к положительному полюсу и меняет цвет, проходя через краситель — становится яркой. Если в изучаемом материале вирусная инфекция отсутствует, то и первая цепочка ДНК не будет выстроена, поскольку не за что будет зацепиться, чтобы выстроить двойную цепь. Следовательно, электрофорез ничего не сможет показать, цвета не будет.

Будете ли вы вакцинироваться от коронавируса?
Нет, однозначно 45.28%

Да, конечно 26.76%

Да, но сначала понаблюдаю как на нее реагируют другие 27.96%
Проголосовало: 22062

Ответы на частые вопросы

Что делать, если результат теста положительный, а симптомов нет? А если это ошибка?

При позитивном итоге исследования человек становится источником инфекции, поэтому сотрудники лаборатории обязаны сообщить о нем в медучреждение, выдавшее направление, и Роспотребнадзор. При отсутствии симптоматики человек должен соблюдать двухнедельный карантин. За это время обязательно проводится повторное тестирование.

Чем «грозит» ложноположительный анализ на антитела к Covid-19?

Вероятность подобного показателя, пусть и всего в несколько процентов, довольно опасна и должна несколько отрезвлять. И в особенности тех, кто сдает на антитела. Ведь человек, который узнает, что он будто бы переболел «Короной», легко может сбросить маску и перчатки и пойти в общественное место (ресторан, офис).

А если таких людей будет много, – а при определенной погрешности их количество, конечно, увеличится – то все предшествующие усилия по борьбе с инфекцией сойдут на нет. Кроме того, нужно учитывать, что ученые еще не уверены в способности человека выработать долгосрочный иммунитет к Sars-CoV-2, и ситуация может еще больше ухудшиться.

Как это работает?

Сначала вирусную ДНК выделяют из материала, представленного в лабораторию, денатурируют: на этом этапе двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94—96 °C, чтобы цепи ДНК разошлись. Затем добавляют так называемые праймеры — начальные звенья цепочки, которые необходимы для старта синтеза новой копии, и так называемую полимеразу — тот самый фермент, который и будет заниматься репликацией ДНК.

Схема: как ДНК-полимераза копирует каждую из цепочек ДНК по отдельности. РНК-праймер изображен белым прямоугольником в начале каждой из двух цепей

Как правило, для лабораторной ПЦР используются ДНК-полимеразы из термофильных бактерий, поскольку в течение реакции смесь многократно охлаждают и нагревают. На следующем этапе в смесь из ДНК, полимеразы и праймеров добавляются нуклеотиды — то есть строительный материал для воспроизводства, после чего емкость с нею нагревается до 37°C, и процесс запускается.

На последующей стадии элонгации полимераза начинает синтез на каждой из двух цепочек разделенной ДНК недостающей пары. Происходит это по принципу комплементарности: фермент присоединяет напротив каждого нуклеотида, из которых состоят ДНК, противоположный. По завершении реакции цикл неоднократно повторяется (см. видео ниже).

Общая схема полимераной цепной реакции. Цифрами обозначены ее этапы. 

В случае с вирусами, содержащими не «двойную» ДНК молекулу, а «одинарную» РНК (а это коронавирусы, или, например, ВИЧ), ученым приходится сначала провести обратную транскрипцию РНК с помощью фермента обратной транскриптазы, а уже потом производить амплификацию по той схеме, что была указана выше. Именно так, собственно, поступает и сам вирус, попадая в клетку, перед тем как встроить свою ДНК в человеческую и приступить к синтезу собственных белков, из которых состоит его «тело» (то есть не генетического материала, а самих вирусных частиц, при ПЦР же, наоборот, копируется генетический материал, а не новые частицы вируса).

Ингибиторы обратной транскриптазы — одни из самых распространенных видов лекарств от ВИЧ-инфекции. К ним относятся, например, зидовудин и ламивудин — самые первые препараты АРВТ, разработанные еще в 80-х.

Производится ПЦР на специальных приборах, амплификаторах, или так называемых термоциклерах (Thermal cycler).

Точность ПЦР тестов

Проблема ОТ-ПЦР в реальном времени ― риск получения ложноотрицательных и ложноположительных результатов. Многие «подозреваемые» случаи с типичными клиническими характеристиками COVID-19 и идентичными специфическими изображениями компьютерной томографии (КТ) не были диагностированы ПЦР тестированием. Т.е. отрицательный результат не исключает заражения COVID-19 и не должен использоваться в качестве единственного критерия для принятия решений о лечении или ведении пациента. В то же время, при отрицательном результате, стоит о задуматься о возможности заражения каким-либо другим вирусом.

Ложноотрицательные результаты могут быть получены из-за мутаций в геноме SARS-CoV-2. Попытка разработать анализ ОТ-ПЦР в реальном времени как можно точнее, может привести к снижению эффективности анализа и потенциальному ложным отрицательном результатам. Несколько типов наборов для ОТ-ПЦР в реальном времени SARS-CoV-2 были разработаны и быстро одобрены, но с разным качеством.

Чувствительность и специфичность самого качественного теста ОТ-ПЦР в реальном времени не составляет 100%.

Ложноположительным результатам сильно способствует процедура отбора проб. Наиболее точным образцом для лабораторной диагностики COVID-19 является мокрота, за ней следуют мазки из носа. Мазки из зева не рекомендуются для диагностики.

Отбор проб для ПЦР

Сбор образцов, таких как мокрота, мазок из носа и мазок из горла, является быстрым, простым и безопасным. Образцы должны быть получены с помощью тампонов из дакрона или полиэстера и должны быть как можно быстрее доставлены в лабораторию. На получение результатов нужно от 24 до 48 часов.

Точность результатов ПЦР-теста на коронавирус очень сильно зависит от соблюдения процедуры отбора проб, скорости доставки проб в лабораторию и качества реактивов.

В случае отрицательного результата ПЦР, но с подозрением на клинические признаки COVID-19 используют несколько типов образцов в разные моменты времени. Сочетание ОТ-ПЦР, клинических характеристик и изображения КТ облегчает диагностику и лечение заболевания.

Когда нужно делать анализ СРБ при коронавирусе: показания к назначению

Ученые из Бостона при изучении результатов обследования больных COVID-19 сделали настоящее открытие — быстрое повышение С-реактивных протеинов в течение первых 2-3 суток после госпитализации является предвестником серьезных осложнений. Именно у таких пациентов впоследствии обнаруживались серьезные проблемы с дыханием, требующим интубации. В то время как у пациентов с нормальным или невысоким уровнем маркеров состояние оставалось стабильным.

В связи с этим тест в обязательном порядке делается при поступлении в стационар, если состояние хотя бы средней степени тяжести. Это помогает спрогнозировать дальнейшее развитие инфекции и назначить эффективное лечение, предотвратив серьезные последствия.

Также это исследование показано при наличии положительных тестов без явных клинических симптомов: гипертермии и кашля, но при подозрении на пневмонию. В этом случае анализ СРБ крови при коронавирусе показывает, что воспалительный процесс уже стартовал, хотя внешне пока не проявился.

Оптимальное время сдачи тестов

Мазок лучше всего делать сразу после контакта с больным или в самом начале заболевания, когда появились первые признаки. В этом случае результаты будут самыми точными.

После выздоровления мазок из носоглотки сдавать нет смысла, так как вирусные частицы покидают организм

Тест на антитела целесообразно делать не раньше чем на 8 сутки болезни. Именно в это время глобулинов становится достаточно для их выявления тест-системами.

Даже спустя неделю после заражения анализ может определить лишь треть заболевших, спустя 2 недели достоверность исследования повышается до 70%, а по прошествии 3-х недель она достигает 90%.

Справка: Антитела типа М пропадают из кровотока после выздоровления. Сколько будут держаться lgG, предсказать невозможно – этот срок может составить как 2-3 месяца, так и несколько лет.

Какой анализ достовернее

Обнаружение антител в крови – это свидетельство текущего или уже завершенного инфекционного процесса, помогающее выявить стадию развития болезни или ее окончание. В заключении можно увидеть 2 типа антител – lgM и lgG.

Для выявления коронавирусной инфекции делают разные анализы. Какой из них необходим конкретному пациенту, решает врач

lgM представляют собой так называемые «быстрые» антитела, которые выбрасываются в кровоток первыми и сразу же вступают в борьбу с патогеном. Их выявление говорит о недавнем заражении коронавирусом.

Глобулины типа М появляются в крови на 3-7 день после контакта с больным и означают, что человек болен прямо сейчас

При этом неважно, есть типичные симптомы или нет. lgM определяются в организме в течение ограниченного периода, не превышающего 2-х месяцев

За этот срок «быстрые» антитела М постепенно заменяются «медленными» lgG, синтез которых стартует примерно на 3-ей неделе болезни.

Внимание! Присутствие в крови обоих типов антител означает позднюю стадию Covid-19, просто выработка lgM пока не закончилась. Такой результат обычно получают во время выздоровления, когда болезнь идет на спад.. Проще говоря, антитела М иногда обнаруживаются не только в острой стадии развития инфекции, но и при ее затухании

Количество иммуноглобулинов тоже сугубо индивидуальный показатель, хотя есть средние – референсные – значения, которые считаются нормой

Проще говоря, антитела М иногда обнаруживаются не только в острой стадии развития инфекции, но и при ее затухании. Количество иммуноглобулинов тоже сугубо индивидуальный показатель, хотя есть средние – референсные – значения, которые считаются нормой.

Если lgM атакуют вирус, не давая размножаться и отравлять организм токсинами, то lgG отвечают за формирование иммунитета в долгосрочной перспективе.

Донором иммунокомпетентной плазмы становятся при таких значениях:

Уровень lgM	Уровень lgG
> 1.5	> 40
> 80

Выбор биологической жидкости

Коронавирус переходит в организм через слизистую носоглотки или конъюнктиву глаз. Он размножается, вызывает воспаление. Затем проникает в кровь. На основе этих данных врач рекомендует биологическую жидкость для проверки на covid-19. В таблице указано, что лучше сдавать, мазок или кровь на коронавирус, чтобы получить достоверный результат, исключить ложные реакции.

Вид биологической жидкости	Рекомендации по исследованию
Мокрота	Сдают в острую стадию. Вирус первоначально попадает в мокроту до распространения в кровоток. Мазок берут из полости носа, зева в первые 10 суток патологии. Так как болезнь передается при чихании, разговоре вместе с мокротой, рекомендуется брать ее мазок после завершения болезни для подтверждения выздоровления
Кровь	Кровь нужно сдать в случае, если человек уже переболел. Выявляют антитела, направленные на возбудитель. Они могут сохраняться до 6 месяцев, после этого момента их концентрация постепенно уменьшается. Лучше брать венозную кровь, капиллярная биологическая жидкость может не содержать РНК covid-19

С помощью экспресс-тестов берут капиллярную кровь из пальца, когда наблюдается острая стадия болезни. Но в этот период антиген может содержаться в малых количествах, поэтому анализ будет ложноотрицательным. Достоверные данные на начальных этапах показывает мазок из носоглотки, определенный методом ПЦР. Если прошло 10-14 дней, можно сдавать кровь, результат будет точным.

Анализ на антитела

Антитела — это иммунные клетки, которые формируются в ответ на внедрение возбудителя. Иначе они называются иммуноглобулины G. Для прохождения исследования требуется сдать биологическую жидкость. Так как антитела присутствуют только в системном кровотоке, берут только венозную кровь. Предварительной подготовки к тесту не требуется, так как иммуноглобулины постоянно концентрируются в организме человека первые 2-6 месяцев после болезни. После прохождения теста возможны следующие результаты:

• отрицательный — полное отсутствие иммуноглобулинов G (вирус не проникал в организм или антитела полностью устранились через 6-8 месяцев);

• положительный — указывают не только наличие иммуноглобулинов G, но и их точное количество.

Чем больше уровень антител, тем активнее и сильнее иммунная защита. Если концентрация иммуноглобулинов менее 50, их хватит не более, чем на 2-4 месяца.

У некоторых пациентов с тяжелым прохождением инфекции уровень антител увеличивается свыше 100 единиц. Такая защита наиболее эффективна, может держаться вплоть до 8 месяцев.

Рекомендуется сдавать анализ на антитела через 1 месяц после завершения болезни, иначе их можно не выявить. Через 30-40 суток число этих клеток многократно увеличивается, достигая максимума. По желанию пациента тест можно проводить повторно через 6 месяцев.

Фальсифицируют?

Впрочем, ненадежность тестов — это лишь одна из претензий. Так, Лена Миро в своем посте и комментариях говорит скорее не об этом, а о намеренных фальсификациях результатов тестов:

«Врачи со всей страны мне пишут, что тесты задерживают на 7-10 дней, а результаты довольно странные.

Медики мне пишут, они говорят о фальсификациях, но публиковать это я не могу.

Думается мне, статистику занижают они».

С материалом о фальсификации тестов на коронавирус выступил и ресурс The Insider. Издание приводит рассказ прилетевшей из Германии девушки. На четвертый день самоизоляции к ней пришли медики из Московской городской поликлиники № 8 и сделали первый тест. Второй должен был быть взят через несколько дней, но больше никто не приходил.

Девушка рассказывает: «Накануне последнего дня карантина я обнаружила у себя в почте готовые результаты анализа на коронавирус, которые пришли, потому что я подключена к сервису „Моя Москва», где собираются в том числе медицинские данные. Результаты оказались отрицательными. Но покопавшись в почте, я обнаружила еще результаты — второго теста, который у меня никто не брал».

По ее словам, бланк исследования был подписан очень странными фамилиями. Назначавший анализ врач фигурирует как Иванов А.А., а проводивший исследование инфекционист назван Петровым В.В.

The Insider

«У меня создалось ощущение, что это неприкрытая липа. Когда сегодня мне позвонили из поликлиники и сказали, что я свободна и карантин окончен, я спросила, почему ко мне не приходили второй раз. В ответ я услышала долгое молчание. В этой связи у меня есть ощущение, что нас обманывают», — резюмирует девушка.

Издание продемонстрировало и другие формы, подписанные теми же фамилиями.

The Insider

Экспресс-тесты на антитела

По состоянию на 23 апреля 2020 г. власти Москвы приобрели почти 250 тысяч тестов на антитела к Covid-19, и они уже начали поступать в столичные поликлиники и больницы. Тест-системы были куплены у фармацевтического холдинга Биотэк, их производителем является голландское предприятие по выпуску медицинского диагностического оборудования Biozek Medical.

Партия содержит примерно 8 тысяч коробок, в каждую из которых помещено 30 тестов. Они позволяют быстро, в течение 10 мин и без дополнительного оборудования выявить носителя инфекции Sars-CoV-2, с целью предотвращения дальнейшей ее передачи окружающим и обеспечения своевременного лечения. Продукция Biozek Medical зарегистрирована в стране производителя и включена в реестр Минздрава Нидерландов.

Тесты на антитела не только помогут изучать развитие пандемии, но и спасут тяжелобольных с коронавирусной инфекцией

Пока неизвестно, есть ли у данных тестов регистрация Росздравнадзора, однако, в соответствии с постановлением правительства РФ №430, ввоз и реализация таких изделий допускается без санкции на то надзорных органов. Единственным условием является регистрация продукта в установленном порядке в стране-изготовителе.

Голландская тест-система определяет наличие в человеческой крови антител IqG и IqM, которые синтезируются в организме иммунной системой для защиты от чужеродных агентов. Антитела IqM достаточно быстро начинают вырабатываться в ответ на попадание инфекции, но их уровень так же быстро падает, они практически «сгорают» буквально за несколько дней.

Антитела IqG продуцируются с некоторой задержкой, иногда возникают только через неделю после заражения. Однако они дольше держатся, и именно благодаря им формируется иммунитет к вирусу или другому патогенному микроорганизму.

Таким образом, если тест покажет полоску, соответствующую антителам М, это будет означать фазу активного, недавнего инфицирования. При наличии характерных симптомов – кашля или повышенной температуры тела – тесты от Biozek Medical помогут дифференцировать Covid-19 от обычной простуды или гриппа.

В случае обнаружения антител G, при котором тест показывает полоску IgG, можно говорить о том, что пациент уже переболел коронавирусной инфекцией.

Справка: точность диагностики в данном случае составляет более 92%.

По словам московских медиков из медучреждений, в которые уже доставлены экспресс-системы Biozek Medical, «четких указаний относительно их применения не поступало. Тесты могут использовать как у пациентов, так и у врачей, находящихся в зоне риска заражения».

«В настоящее время диагностика на антитела в крови проводится только по направлению врача, в порядке эксперимента. Пациент при этом должен иметь подтвержденный диагноз «коронавирус» и дать согласие на процедуру. Сам анализ берут в больнице или на дому», – говорит депутат Московской городской думы М. Тимонов.

На какой день тест на коронавирус становится отрицательным после болезни

Коронавирус может протекать бессимптомно, но чаще наблюдают его легкую форму. В случае тяжелого течения развивается пневмония и дыхательная недостаточность. В первых 2 случаях человека не госпитализируют, он лечится дома. Когда состояние ухудшается, он вызывает скорую помощь и его переводят в специальный госпиталь. Для подтверждения полного выздоровления от COVID-19 должны исчезнуть симптомы болезни. Когда это происходит, проводят один тест, а потом, через день – второй для уточнения. При отрицательном результате человека выписывают.

Какие индивидуальные средства защиты от коронавируса вы используете?
Ношу маску в общественных местах 65.66%

Использую антисептик 3.33%

Маска + перчатки + антисептик 23.82%

Никакие 7.19%
Проголосовало: 4420

При легкой форме

При легком течении болезни, если лечение начато вовремя, человек будет здоров по истечении 12-14 суток с момента появления признаков заражения. В этот период гипертермия уже фактически отсутствует, а работа внутренних органов приходит в норму. Заболевший может уже чувствовать себя как обычно, но даже в этом случае вирус в организме еще сохраняется на протяжении некоторого времени. Так, если у пациента нет признаков коронавирусной инфекции, проводят тест. Когда он дает положительный ответ, делают повторный – через сутки. Если вторичная проверка отрицательная, человека считают выздоровевшим от коронавируса.

При средней форме

При заболевании средней тяжести выздоровления может занять порядка пары недель. Только по завершении этого периода, при условии заметного улучшения состояния больного, ставят вопрос о возможности прохождения повторного теста на коронавирус. Это обусловлено тем, что лабораторное исследование даст положительный ответ, если взять мазок раньше, чем исчезнут выраженные проявления заболевания.

При тяжелой форме

В случае тяжелого течения ожидать, что тест покажет отрицательный результат ранее 3 недель с момента выявленного заражения, не стоит. Иногда процесс выздоровления человека от коронавирусной инфекции может занимать и до 6 недель. Но даже по окончании этого периода остаточные следы COVID-19 могут присутствовать в исследуемом биоматериале. Это подтверждают и отзывы переболевших.

Будете ли вы вакцинироваться от коронавируса?
Нет, однозначно 45.28%

Да, конечно 26.76%

Да, но сначала понаблюдаю как на нее реагируют другие 27.97%
Проголосовало: 22055