Что такое пцр тест на коронавирус и как проводится

Техника забора

Для получения максимально достоверных результатов тупфер вводится глубоко в носовые ходы (примерно на 2 см) особым движением, чтобы избежать травмирования слизистой, а также исключить рвотный рефлекс, приступ кашля или чихание.

Медицинский работник при контакте с потенциально зараженным пациентом одет в защитный комбинезон, перчатки, на голове – специальный экран или очки, респиратор.

В целях снижения распространения инфекции в некоторых лабораториях недавно ввели новую бесконтактную методику забора проб. Человеку дают контейнер с ватным зондом и объясняют, как взять мазок самому.

Мазок для ПЦР-исследования – это самый информативный анализ на коронавирус

Ничего сложного здесь нет – тупфером проводят по внутренней поверхности щек максимально глубоко, ближе к миндалинам, а также внутри носовых ходов. Зонд прижимают к телу как можно плотнее, но при этом стараются не причинять себе боли и сильного дискомфорта.

Оба взятых мазка помещают в один контейнер, чтобы концентрация вируса, если он есть, была наибольшей.

При выборе бесконтактного способа возможно прибытие курьера на дом, с предоставлением клиенту подробной инструкции по взятию мазка. Это значит, что человек самостоятельно берет у себя образец, подписывает контейнер, запечатывает его в конверт и передает обратно курьеру.

Справка: Ввиду вероятности некорректного забора проб тестирование проводят как минимум 2 раза. Причем ошибки возможны не только при «самосдаче», но и в случае взятия мазка квалифицированным специалистом.

Какой должен быть тест

Тесты на наличие инфекции должны обладать тремя качествами: высокой скоростью обнаружения, высокой чувствительностью и специфичностью.

Скорость обнаружения нужна для быстрого исследования. Получать результат в разгар болезни — потерять время на лечение.

Чувствительность определяет количество истинно больных лиц в обследуемой группе. Чем выше чувствительность, тем выше ценность отрицательного результата, т.е. возрастает уверенность в том, что отрицательные результаты можно обнаружить только среди здоровых лиц.

Специфичность определяется количеством истинно здоровых лиц в обследуемой группе. Чем выше специфичность, тем выше ценность положительного результата. Т.е. тем выше уверенность в том, что положительный результат обнаруживают только у больных.

Наибольшую ценность имеют тесты, обладающие одновременно и высокой чувствительностью, и высокой специфичностью. Однако такое соотношение достаточно редко, и попытки повысить специфичность обычно ведут к снижению чувствительности, а увеличение чувствительности влечёт за собой снижение специфичности.

О точности диагностики

В России одобрены к использованию десятки тест-систем для выявления коронавируса. Ключевые характеристики — диагностические специфичность (точность) и чувствительность. Первый параметр показывает способность набора определить конкретный вирус. Второй — возможность обнаружить его части, даже если в биоматериале их очень мало. «Чем эти параметры ближе к ста процентам, тем лучше», — подчеркивает Тамара Силкина.

«Порог чувствительности — общий как для российских, так и для зарубежных тестов: 10³ на миллилитр. То есть должно быть не менее тысячи вирусных геном-эквивалентов на миллилитр образца. «ДНК-технология» заявила о чувствительности 10¹ — десять вирусных единиц на миллилитр. Другой важный показатель — воспроизводимость, то есть возможность получить одинаковый результат в разных условиях. Нужно учитывать и сходимость — отсутствие существенных различий между измерениями, выполненными в одинаковых условиях», — добавляет медик.

Метод ПЦР с обратной транскрипцией хорошо отработан и практически полностью автоматизирован. С момента попадания в лабораторию анализ занимает четыре-шесть часов. В мире эти тесты буквально поставили на поток. Только в Москве, по официальным данным, сделали 12 миллионов анализов.

Поскольку этот метод прямо выявляет возбудителя в организме, его относят к доказательной медицине и рекомендуют учитывать в клинической практике. Однако анализ больших данных говорит, что при массовом использовании ПЦР-тесты часто промахиваются.

Ложнонегативные результаты получаются в 20-66 процентах случаев. Такие данные из литературы приводят исследователи из Сеченовского университета. Вместе с зарубежными коллегами они изучили записи пациентов, госпитализированных в университетскую клинику в апреле — мае. Из 3480 человек, чьи ПЦР-тесты были доступны, примерно половина оказались чистыми. В то же время клиническая картина и КТ легких указывали на коронавирусную инфекцию. Авторы допускают, что в реальной клинической практике ПЦР-анализ не столь и критичен.

«Этиологическая диагностика, которая выявляет причину заболевания, нужна априори, — не соглашается Айрат Мавзютов, заведующий кафедрой фундаментальной и прикладной микробиологии, профессор кафедры лабораторной диагностики Башкирского государственного медицинского университета, руководитель Исследовательского центра «Лаборатория». — При вирусных инфекциях других, сравнимых по чувствительности и специфичности (точности), методов, кроме ПЦР-тестирования, нет».

Важно понимать, объясняет профессор Мавзютов, что клинический диагноз опирается на субъективные данные — анамнез (опрос) и осмотр пациента. На их основании невозможно установить вирусную природу заболевания и тем более какой именно возбудитель его вызвал

Для этого проводятся лабораторные исследования. Получаемые при этом данные, продолжает ученый, намного объективнее, поскольку большинство современных методов лабораторных исследований автоматизировано. Соответственно, на результаты не повлияют случайные факторы: уровень подготовки специалистов, их настроение, «погода в доме» и так далее.

«Диагноз COVID-19 можно поставить, только когда в материале от больного обнаружили РНК вируса SARS CoV-2 методом ПЦР или же антигены этого вируса иммунохимическими методами. Не выявив следов вируса в организме, нельзя говорить о «ковидной» природе заболевания или летального исхода», — утверждает Айрат Мавзютов.

Он обращает внимание на еще один аспект. ПЦР-тест не отличает РНК вируса, способного к репродукции, то есть размножению, от обломков «нежизнеспособных» вирусных частиц

Он лишь позволяет понять, присутствует или нет РНК коронавируса в клетках.

«Пока инфицированные клетки не заменятся на новые, а на это уходит от двух до четырех недель, не исключены положительные результаты. При этом вирус может быть уже «мертвым», человек здоров и никому не опасен», — отмечает профессор. Для уточнения учитываются данные целого ряда дополнительных исследований, позволяющих на лабораторном уровне оценивать остроту воспалительного процесса или образование антител на стадии его завершения.

Кому следует пройти обследование

Обследование на коронавирусную инфекцию COVID‑19 при помощи тестирования нужно для таких групп населения:

• с симптомами ОРВИ (температура, боль в горле, кашель, заложенность носа, головная боль, общая слабость);
• вернувшимся из заграничных поездок, командировок;
• контактировавшим с зараженными дома или на работе, прибывшими из очагов пандемии (Китай, Иран, Южная Корея, США, Западная Европа, Украина, Белоруссия);
• с диагнозом пневмония;
• при сомнительных признаках респираторного заболевания (например, есть только сильная слабость) в возрасте от 60 лет и сопутствующими болезнями сердца, легких, диабетом, при онкологии;
• медработникам или контактирующим с зараженными в местах изоляции;
• находящимся в закрытых коллективах (например, дом-интернат, курсанты).

Участковым врачом или прибывшим на вызов скорой помощи могут быть определены и индивидуальные показания для обследования.

Тесты на коронавирус направлены на поиск вирусной РНК, а также антител в крови. Если их назначается врач, то они проводятся бесплатно, при самостоятельном обращении в клиники или вызове на дом сотрудника частной лаборатории необходима оплата. При положительном результате потребуется изоляция, а при наличии симптомов – лечение инфекции. 

Как узнать, есть ли антитела к коронавирусу?

Для исследования у человека берется небольшое количество крови с пальца или из вены и подвергается тестированию на антитела класса G (IgG). Полученный результат оценивается и дает возможность сделать выводы о наличии или отсутствии антител к коронавирусу.

Что показывает тест на антитела к коронавирусу?

В крови человека, болеющего или переболевшего коронавирусом, обнаруживается иммуноглобулин (антитела):

• IgM – болезнь находится в острой стадии;
• IgG – человек перенес заболевание, иммунитет формируется.

В зависимости от наличия того или иного вида антител тест покажет соответствующий результат.

Результаты теста на антитела к Covid-19

Существует пять вариантов интерпретации анализа:

IgM

Тест на антитела к коронавирусу положительный или отрицательный – что это значит?

В зависимости от результата теста определяется дальнейшая тактика работы с пациентом:

Метод ИФА

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) по своему принципу довольно прост. Для определения наличия антител в крови используются микропланшеты (пластиковые пластины), покрытые вирусным белком. При попадании на такую пластину крови пациента происходит реакция, дающая возможность выявить наличие или отсутствие в ней специфических антител. Отличается максимальной точностью результата.

Метод ИФА бывает:

• качественным — ответ подразумевает наличие или отсутствие искомого вещества в образце, дает ответ болел человек или нет, как давно болел;
• количественным (полуколичественный) — позволяет не только определить болел или нет, но и дает оценку концентрации антител в крови пациента. Это позволяет выяснить, насколько сильно отвечает иммунитет на вирусное заражение, может ли человек стать донором антител.

Для анализа берется кровь из вены. Результат будет известен через 1-3 дня. Для проведения исследования требуется специальное оборудование.

Метод ИХЛА

Расшифровывается, как иммунохемилюминесцентный анализ, тестирование ИХЛА является модификацией ИФА. Он более чувствителен к специфическим антителам, точность анализа составляет 90 %. Антитела определяются иммунной реакцией антигена с антителом. Для получения результата необходимо дополнительное оборудование.

Метод ИХА

Иммунохроматографический анализ (ИХА) относят к экспресс-тестам. Результат можно оценить уже через 15 минут. Метод не требует никакого оборудования и тестирование может проводиться в любых условиях. Принцип определения аналогичен тестам на беременность: используются полоски, кассеты или панели.

Этот вид анализа основан на разделении частиц методом парной связки и реакции между антителом в биоматериале пациента и антигеном. Берется кровь из пальца.

Экспресс-тесты на антитела методом ИХА — проводится по принципу глюкометра. По капле крови можно определить имеется или нет в крови специфический белок. Чтобы определить количество или скорость увеличения концентрации, потребуется проведение дополнительных исследований.

Результат качественный: есть или нет антитела IgM и IgG.

Подробнее

Как делается и сколько стоит тест

В настоящее время не существует готовых тестов, которые можно приобрести в аптеке и провести самостоятельно. Анализ на коронавирус делают только в лабораториях, оснащенных высокотехнологичным оборудованием и имеющих специальное разрешение. Это связано с тем, что проведение исследований представляет определенную опасность и предполагает работу с высоким уровнем патогенности микробов.

В ближайшее время планируется внедрить в медицинскую практику диагностические мини-лаборатории, с помощью которых можно будет выявить Covid-19 в небольших населенных пунктах и даже дома. Не исключено, что вскоре появятся предельно простые тесты, аналогичные тестам на уровень глюкозы.

Существующие на сегодняшний день экспресс-тесты имеются в каждом крупном городе, где находятся центры эпидемиологии и гигиены. Но просто прийти и сдать анализ не получится, необходимо направление от врача.

Тесты на коронавирус делают почти 400 государственных и частных медклиник, включая 150 лабораторий Роспотребнадзора

При наличии выраженных симптомов, когда нужна госпитализация, или имевшихся недавно контактах с зараженными людьми врач обязательно назначит анализ на Covid-19, и его проведут бесплатно.

С 8 апреля 2020 г пройти тестирование можно во всех лабораториях РФ, включая частные. Анализы на коронавирус берут в следующих клиниках:

• Гемотест;
• Ситилаб;
• Хеликс;
• LabQest.
• Стоимость исследования составляет 1.9 – 3.5 тыс. руб.

Такие известные и крупные лаборатории, как Инвитро и KDL, отказались от массового забора анализов у населения. Руководствуясь соображениями безопасности, они проводят исследования только по заданию медицинских учреждений.

Стоит отметить, что при отсутствии симптоматики сдавать любые тесты практически не имеет смысла, поскольку следы вируса можно найти только в эпителиальных клетках носоглотки. А если кашля, чихания или насморка нет, то слизистые горла и носа еще не поражены, и вирус в них не успел проникнуть. Это значит, что анализ на определение Covid-19 не даст достоверного результата, ведь инкубационный период длится 20 и более дней. При малой концентрации инфекции тест может ее просто не «заметить». Вот почему необходимо взять анализ повторно.

Справка: многие частные клиники также планируют проводить исследования на коронавирус. Цена пока неизвестна, но предположительно она составит до 10 тысяч.

Когда можно получить результат после проведения теста на коронавирус

При исследовании по методу ПЦР ответ можно получить в течение нескольких часов, а если случай сложный, то на это уйдет два дня.

Сдать мазок анонимно не получится. Если результат положительный, придется сидеть на карантине или пройти стационарное лечение — решение будет принимать доктор по степени тяжести заболевания. Кроме этого, будут выявлены все контактные лица, и они также будут проверены на наличие коронавируса.

В случае, когда у контактных результат отрицательный, придется повторить тест через 4 дня, поскольку велика вероятность ошибки из-за слишком раннего забора анализов.

Как пациенты узнают результаты?

Скорость определения специфического иммуноглобулина в крови человека составляет примерно 10-15 минут. Проводить анализ можно в условиях больницы или дома. Ответ будет дан сразу.

Значения результата анализа можно расшифровать по полоскам, которые проявляются после нанесения капли крови пациента:

Высветилась полоска напротив значения G – человек переболел и в крови содержатся антитела к вирусу.

Ярко высвечивается полоска напротив значения М – происходит активная выработка иммуноглобулина М, что свидетельствует об активном заражении вирусом. Требуется обратиться к врачу!

Появилась полоска напротив значения G и M — это значение говорит о ранее перенесенном заболевании или начинаете выздоравливать, но инфекция присутствует.

Нет полоски С на тесте на коронавирус? Полоска напротив C свидетельствует о рабочем состоянии теста. Если экспресс-тест показал значение IgG, IgM без полоски C, то результат теста недействительный. Нужно еще раз провести тестирование.

Расшифровка экспресс-теста

Когда делают экспресс-тест?

Целесообразно проводить «быстрый» тест не ранее 7 дней от начала заболевания. Именно в острой стадии, которая обычно наступает на 7-10 день, наиболее активно вырабатывается иммуноглобулин класса М.

Затем наступает стадия, когда активность иммуноглобулина IgM снижается и вырабатывается иммуноглобулин IgG. Это говорит о том, что сформировались антитела к перенесенной вирусной инфекции, выработался определенный иммунитет.

Если анализ не показал наличие специфического иммуноглобулина, то можно делать вывод о том, что либо анализ проведен слишком рано, либо человек не переболел.

А что, если результаты – неверные, «ложноположительные»?

Речь идет не только о сбоях тест-системы при исследовании образцов, но и о неспецифической реакции. Дело в том, что антитела М не отличаются особой избирательностью и могут вырабатываться в ответ на воспалительные, аутоиммунные процессы. Кроме того, они часто появляются на фоне беременности и гормональных сбоев.

Учитывая данный факт, результаты тестов на антитела должны подтверждаться данными анализа мазка-ПЦР, иначе диагноз может быть неточным.

Ложноположительные результаты на определение антител G бывают реже, чем у глобулинов М

В свою очередь, и ПЦР-анализ нередко дает недостоверные сведения, что связано с поведением вируса в организме. Иногда его молекулы сразу оказываются в нижних дыхательных путях или постепенно вымываются со слизистых носоглотки. Следовательно, в образец вирионы просто не попадают несмотря на их присутствие в организме. Вот почему рекомендуется сдавать оба анализа.